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神经元之间的环路毗连很是重大，，，，，完整而准确地显示这些环路的结构和转变，，，，，对展现许多疾病的病因和新治疗要领的开发具有很是主要的意义。。。。。
古板的神经示踪要领如电镜、Golgi染色、染料、肽类标记物等可以显示神经元的形态和投射，，，，，少数示踪剂如WGA、TTC等还可以实现跨突触标记，，，，，但这些要领都具有信号间接、偏向不特异、跨突触后信号衰减严重等弱点，，，，，最主要的是，，，，，这些染料无法携带基因，，，，，因此只能显色。。。。。自20世纪80年月，，，，，Kristensson首次应用纯粹疱疹病毒（HSV）跨突触标记神经元后，，，，，种种各样病毒载体在环路示踪方面的应用越来越受到重视。。。。。
但需要注重的是，，，，，虽然这类嗜神经病毒关于神经环路的标记具有很强的熏染性和特异性，，，，，但其免疫原性很强，，，，，动物往往在注射后数天殒命，，，，，无法举行行为测试或者心理研究，，，，，现在更适用于寻找未知的神经环路，，，，，别的此类病毒需要PII以上品级的实验室。。。。。因此，，，，，越来越多的研究使用AAV举行环路示踪标记。。。。。由于AAV自己无复制能力，，，，，且其免疫原性极低，，，，，因而其不会造成大宗的迫害，，，，，亦不会影响动物的正常心理，，，，，故AAV成为最常用的环路示踪工具病毒载体。。。。。
神经元是具有极性的细胞，，，，，信息从上一级神经元的轴突通过突触转达到下一级神经元的树突，，，，，之后爆发树突、胞体的信息整合，，，，，并通过轴突再次发出。。。。。因此涉及神经环路的标记包括偏向性（顺向：胞体至轴突的标记；；；；；；逆向：轴突至胞体的标记）和是否跨突触两大基本问题。。。。。
神经环路示踪手艺的目的
（改自Peter L Strick, et al., eLS, 2011）
环路示踪应用案例
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基于AAV的顺向非跨突触标记
①客户揭晓文章：Science. (IF=41.058). Mu D,et.al. (2017). A central neural circuit for itch sensation. [腺相关病毒, 痒, 光遗传,化学遗传]
注射部位：小鼠PBN
载体：AAV-hSyn-HA-hM4Di-IRES-mCitrine
血清型：AAV2/9
病毒滴度：1.0E+13VG/mL
注射体积：150nl
视察时间：3周
②客户揭晓文章：Neuron. (IF=14.319). Tian-Le Xu,et.al. (2019). Central Processing of Itch in the Midbrain Reward Center. [AAV，，，，，痒，，，，，光遗传学]
注射部位：Vgat- Cre小鼠VTA
载体：AAV-EF1a-DIO-ChR2(H134R)-mCherry
血清型：AAV2/8
病毒滴度：7.39E+12VG/mL
注射体积：300-400nl
视察时间：2-3周
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基于AAV的逆向非跨突触标记—rAAV2/retro
①客户揭晓文章：Biological Psychiatry. (IF=11.984). Bing Xing Pan,et.al. (2018). Chronic stress causes projection-specific adaptation of amygdala neurons via SK channel downregulation. [腺相关病毒, 焦虑症, 光遗传]
注射部位：小鼠dmPFC、VHPC
载体：AAV2/1-retro-Syn-eYFP-Cre、AAV2/8-CaMKIIα-DO-SK2&AAV2/8-CaMKIIα-DIO-SK2-mCherry
注射体积：300nl
视察时间：4周
②内部测试效果
注射部位：小鼠BPN
载体：rAAV2-retro-hSyn-EYFP
视察时间：4周
基于AAV的跨突触标记
1 、基于AAV的顺向跨突触标记-- rAAV2/1
①客户揭晓文章：Nature Neuroscience. (IF=19.912). Yao J,et.al. (2018). A corticopontine circuit for initiation of urination. [腺相关病毒, 神经环路]
注射部位：小鼠皮层M1、PMC
载体：rAAV2/1-hSyn-Cre&rAAV2/9-DIO-hChR2(H134R)-mCherry、rAAV2/9-DIO-GCaMP6s
病毒滴度：rAAV2/1: 5E+12VG/mL；；；；；；rAAV2/9-DIO-hChR2：1.2E+13VG/mL；；；；；；rAAV2/9-DIO-GCaMP6s：0.5E+12VG/mL
注射体积：多点注射，，，，，每位点30-40nl
视察时间：4周
②客户揭晓文章：Science Advances. (IF=11.511). Ping Zheng,et.al. (2019). Crucial role of feedback signals from prelimbic cortex to basolateral amygdala in the retrieval of morphine withdrawal memory. [腺相关病毒, 成瘾, AAV1, AAV-WGA-Cre]
注射部位：小鼠皮层BLA
载体：rAAV2/1-hSyn-Cre-EGFP
病毒滴度： 1.13E+13VG/mL
注射体积：60nl
视察时间：5周
2 、借助WGA的跨突触标记—AAV-WGA-Cre
客户揭晓文章：Science Advances. (IF=11.511). Ping Zheng,et.al. (2019). Crucial role of feedback signals from prelimbic cortex to basolateral amygdala in the retrieval of morphine withdrawal memory. [腺相关病毒, 成瘾, AAV1, AAV-WGA-Cre]
注射部位：小鼠PrL
载体：AAV-hSyn-mCherry-IRES-WGA-Cre
病毒滴度：4.28E+12VG/mL
注射体积：300nl
视察时间：4周
