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基因操作

内源性基因转录激活/抑制

  通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点,,,Cas9卵白的切割能力损失酿成dCas9卵白,,,dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置连系在DNA上,,,在此基础上,,,研究职员在复合物的后方毗连一些转录调控元件,,,如转录激活的VP64、VP16等,,,转录抑制的KRAB等,,,同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游,,,即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。。
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 优势

  ① 通例基因过表达都是将外源基因转入,,,外源基因的兼容性一定低于内源基因。。
  ② 关于一些涉及多次跨膜的卵白,,,外源转入的基因常表达功效不完整的卵白,,,导致过表达无效,,,而对内源基因的转录激活无需担心此问题。。
  ③ 由于容量问题,,,许多大的基因片断难以构建进载体,,,而基于dCas9卵白的转录激活识别的是转录起始点,,,关于基因巨细无要求,,,因此可用于研究大基因片断的过表达。。

 载体选择(部分)

可以对特定基因举行内源性的转录激活或抑制。。
载体种别 编号 载体元件
CRISPRa(转录激活)慢病毒载体 H7284

pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-MCP-P65-HSF1-IRES-BSR-WPRE

H7281

pLenti-CMV-dCas9-VP64-T2A-Puro-WPRE

H9517

pCLenti-U6-gRNA-MS2-EFS-dCas9-VP64-T2A-BSD-WPRE

E2577

pCLenti-EF1a-MCP-P65-HSF1-T2A-Hygro-WPRE

CRISPRa(转录抑制)慢病毒载体

H6929

pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-NLS-MCP-KRAB-IRES-BSR-WPRE

H7283

pLenti-CMV-dCas9-KRAB-T2A-Puro-WPRE


 相关手艺效劳

  • 基因过表达

  • 基因滋扰

  • CRISPR/Cas9


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