Cre/loxP系统简介
泉源噬菌体P1的Cre/loxP系统主要包括2个主要组成部分:一个是loxP位点,,,,,另一个就是可以对loxP位点举行识别的Cre酶,,,,,可以实现对目的基因删除、翻转、易位和序列交流。。。。使用特异性的启动子使Cre酶在特异性的组织器官表达,,,,,实现对特定的组织或细胞基因的操作,,,,,同时可以在Cre/loxP系统中添加ERT2,,,,,实现在特准时间对目的基因的操作。。。。
病毒载体介导的Cre/loxP系统,,,,,除了具备以上特点之外,,,,,相较于转基因小鼠,,,,,可以大大缩短实验的周期。。。。另外,,,,,多种多样的病毒载体,,,,,可以最大限度的知足种种实验的需求。。。。
州病毒载体的特点如下:
病毒载体介导的Cre/loxP系统应用案例:
使用AdV介导的Cre系统可以实现对特定组织器官的快速敲除。。。。美国爱因斯坦医学院的Rajat Singh团队【1】,,,,,使用AdV载体携带Cre酶基因,,,,,注射到Atg7f/f工具鼠棕色脂肪组织,,,,,对脂肪组织Atg7基因举行编辑,,,,,5天后对Atg7表达举行剖析,,,,,Atg7显著镌汰。。。。
使用LV介导的Cre系统整合至基因组的特征,,,,,可以实现稳固细胞株的构建。。。。荷兰马斯特里赫特大学医学中心Anita Kneppers研究团队【2】,,,,,使用LV病毒载体构建了一种基于Cre/ loxp的细胞融合报告系统,,,,,实现成肌细胞-肌管融合后荧光素酶的条件表达。。。。
rAAV具有免疫原性低、多血清型、长时间表达等特点,,,,,在体内研究中普遍应用。。。。德国慕尼黑大学Oliver J. Muller 研究团队【3】使用AAV-TnT-Cre特异性对成年小鼠心脏的基因举行敲除,,,,,从而替换MerCreMer-Tamoxifen系统,,,,,阻止Tam对心脏功效爆发的副作用。。。。
scAAV即自互补AAV,,,,,填补了rAAV病毒载体表达较慢的弱点,,,,,熏染3天后即可表达,,,,,同时可以长时间表达。。。。德国慕尼黑工业大学Stefan Engelhardt 研究团队【4】,,,,,使用scAAV-iCre对miR-29 b2cfl/fl 小鼠心肌细胞的miR-29 b2c举行特异性敲除。。。。
参考文献:
【1】Martinez-Lopez N, Garcia-Macia M, Sahu S, et al. Autophagy in the CNS and periphery coordinate lipophagy and lipolysis in the brown adipose tissue and liver[J]. Cell metabolism, 2016, 23(1): 113-127.
【2】Kneppers A, Verdijk L, de Theije C, et al. A novel in vitro model for the assessment of postnatal myonuclear accretion[J]. Skeletal muscle, 2018, 8(1): 1-13.
【3】Werfel S, Jungmann A, Lehmann L, et al. Rapid and highly efficient inducible cardiac gene knockout in adult mice using AAV-mediated expression of Cre recombinase[J]. Cardiovascular research, 2014, 104(1): 15-23.
【4】Sassi Y, Avramopoulos P, Ramanujam D, Grüter L, Werfel S, Giosele S, Brunner AD, Esfandyari D, Papadopoulou AS, De Strooper B, Hübner N, Kumarswamy R, Thum T, Yin X, Mayr M, Laggerbauer B, Engelhardt S. Cardiac myocyte miR-29 promotes pathological remodeling of the heart by activating Wnt signaling. Nat Commun. 2017 Nov 20;8(1):1614.
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