【新要领】外泌体相关AAV，，，，，系统给药后体内有用熏染淋巴细胞
通过逆转录病毒或慢病毒对干细胞或T细胞举行基因刷新的体外基因治疗，，，，，在治疗免疫缺陷和癌症上有显著疗效，，，，，可是这一历程本钱高昂，，，，，手艺上具有挑战性，，，，，禁止易被普遍使用。。直接的体内基因治疗可以阻止这些问题，，，，，且腺相关病毒（AAV）载体在临床试验中已被证实是清静有用的。。然而，，，，，系统给药后体内AAV对淋巴细胞的熏染能力怎样尚未被仔细研究。。
本文[1]作者用标准的AAV8和外泌体相关的AAV8载体（exo-AAV8）划分对小鼠举行系统给药，，，，，发明两种要领都能有用地熏染大宗的免疫细胞群，，，，，包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞。。通过检测AAV基因组和递送基因的mRNA，，，，，提供了细胞被熏染的直接证据。。本文建设了AAV介导体内基因递送到免疫细胞的可行性，，，，，这将增进基础和应用研究朝着体内基因免疫治疗的目的生长。。
之前有报道批注，，，，，与古板的AAV载体相比，，，，，外泌体相关的AAV（exo-AAV）载体在小鼠体内介导了更高的靶器官熏染效率。。为了确定这些载体在系统递送时是否能介导免疫细胞的体内熏染，，，，，作者给C57BL/6小鼠静脉注射了3*10的12次方genome copies的exo-AAV8（AAV-sc-CBA-GFP）（Fig.1A），，，，，用PBS作为比照组。。注射21天后，，，，，作者从脾脏、淋投合和肝脏中疏散免疫细胞，，，，，通过流式细胞术检测GFP在CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞中的表达（Fig.1B-D）。。
实验效果批注，，，，，在脾脏和淋投合中，，，，，CD4+T细胞中GFP表达为6.2-6.4%，，，，，CD8+T细胞中GFP表达为8.2-8.8%，，，，，B细胞中GFP表达为2.5-2.6%，，，，，巨噬细胞中GFP表达为5.9-6.9%，，，，，树突状细胞中GFP表达为6.8-7.0%。。值得注重的是，，，，，肝脏中所有5种细胞类型的表达水平都显着较高，，，，，GFP阳性细胞的百分比在32.6-38.7%之间。。
为了研究基因表达动力学，，，，，作者给小鼠注射9.1*10的11次方gc的exo-AAV8-sc-CBA-GFP，，，，，并在注射后第3天、7天、14天、21天和28天从血液中剖析免疫细胞。。效果显示，，，，，CD4+T细胞和CD8+T细胞中GFP阳性细胞的百分比在第14天抵达岑岭，，，，，并在28天后缓慢下降。。B细胞的熏染效率在第3天时抵达岑岭，，，，，2周内坚持稳固，，，，，28天时略有下降。。
为了直接较量古板AAV载体与exo-AAV载体的熏染效率，，，，，作者给小鼠注射了相同剂量的含有相同sc-CBA-GFP结构的载体。。如Fig.3所示，，，，，两种载体在选定的免疫细胞中介导了相似的熏染水平，，，，，而古板的AAV在某些细胞中爆发的比例略高。。
为了提供更多exo-AAV8直接熏染免疫细胞的证据，，，，，作者从第12天小鼠的脾脏中分选了CD4+和CD8+T细胞，，，，，并用qPCR从AAV基因组中疏散DNA来检测GFP cassette，，，，，以及用qRT-PCR检测GFP mRNA。。关于CD4+和CD8+T细胞，，，，，作者发明在exo-AAV8-GFP注射的小鼠中，，，，，AAV基因组的水平比PBS注射的比照组中高6.4和5.8倍（Fig.4A）。。同样，，，，，作者在注射exo-AAV8-GFP的小鼠中检测到GFP cDNA水平划分高6.0和3.4倍（Fig.4B）。。这些数据批注，，，，，系统注射exo-AAV8载体可以介导体内免疫细胞的熏染。。
作者构建了一个编码人白细胞介素-2受体α链（IL-2Rα）又称CD25的sc AAV质粒，，，，，并且获得了exo-AAV8-sc-CBA-hCD25载体（Fig.5A）。。随后给小鼠静脉注射1*10的12次方gc的exo-AAV8-sc-CBA-hCD25或PBS作为比照。。注射后第12天，，，，，用流式细胞术检测血液、脾脏、淋投合和肝脏中的CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞的hCD25 （hCD25）表达（Fig.5B，，，，，C）。。
作者对exo-AAV8载体应用于体内的效果举行验证，，，，，发明将exo-AAV8系统注射小鼠后能有用熏染脾脏、淋投合和肝脏中的免疫细胞，，，，，如CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞。。别的，，，，，除了本文提及的效果，，，，，exo-AAV载体应用在体内递送还可以引入其他开发的潜力，，，，，包括降低宿主抗体对AAV颗粒的识别以及通过用相关配体修饰外泌体来实现细胞靶向战略的远景等。。
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