UG环球双十一?科研不缺席 | 双萤光素酶检测实验——机制研究的利器
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双萤光素酶报告系统先容
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应用先容
miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用（降解或抑制翻译）， ，，将目的基因3’UTR（野生型和连系位点突变型）序列构建至载体中报告基因F-Luc的3’端， ，，通过较量过表达miRNA后， ，，报告基因表达的改变（萤光素酶的活性下降照旧稳固）， ，，来确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。。。。。。
转录因子主要通过作用于靶基因的启动子起作用， ，，将目的基因启动子区序列替换报告基因F-Luc的启动子， ，，通过共表达转录因子后， ，，报告基因表达的改变， ，，来确定转录因子与靶基因启动子连系位点及对靶基因的作用。。。。。。
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手艺蹊径
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常见应用偏向总结
● 验证miRNA同mRNA靶向互作。。。。。。将靶mRNA的3’UTR序列插入报告基因载体， ，，再共转入该miRNA， ，，若是萤光素酶活性下降， ，，则提醒为其靶序列。。。。。。
● 验证miRNA同circRNA靶向互作。。。。。。将circRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域， ，，检测萤光素酶活性。。。。。。
● 验证miRNA同lncRNA靶向互作。。。。。。将lncRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域， ，，检测萤光素酶活性。。。。。。
● 启动子活性剖析。。。。。。将启动子区域序枚举行分段截短， ，，再划分构建入报告基因载体， ，，检测其启动子活性。。。。。。
● 验证特定转录因子同启动子的作用。。。。。。将启动子区域插入报告基因载体， ，，同时在实验细胞中共转该转录因子， ，，剖析转录因子过表达是否提高萤光素酶活性。。。。。。
● 剖析信号通路是否激活。。。。。。将该信号通路的下游响应原件序列构建入报告基因载体， ，，在差别上游信号条件下， ，，萤光素酶活性代表了通路的下游响应。。。。。。
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