慢病毒系列|让你“为所欲为”调控基因(细胞篇)
基因调控与疾病研究
基因表达调控是生物体内基因表达的调理与控制,,,,使细胞中基因表达的历程在时间、空间上处于有序状态,,,,并对情形条件的转变作出重大反应的历程。。。。现代医学研究证实,,,,所有的疾病,,,,除了外伤、中毒或营养不良以外,,,,险些都跟基因有关。。。。在疾病研究的领域,,,,基因表达的调控险些是所有生物学历程的基础。。。。 某些基因的改变会导致相关功效的缺失或是激活,,,,与疾病的爆发涯在着因果关系。。。。疾病的驱动是一个历程,,,,差别基因的改变可能加入疾病形成的差别阶段,,,,例如肠癌从癌前病变到肿瘤的历程,,,,早期有APC等基因加入,,,,后期有RAS、PIK3CA等基因加入。。。。当科学家第一次发明疾病和基因之间关系的时间,,,,研究者便最先征服疾病之旅——希望找到某种疾病和某一基因之间的关系。。。。 一把钥匙开启一把锁,,,,某个特定基因的改变导致某种疾病的爆发,,,,人类对疾病认知的更新会带来治疗战略的厘革,,,,而新的理论,,,,往往依赖于更便捷、更有用的研究手艺与手段。。。。慢病毒有适用宿主规模广、基因容量大、熏染效率高、整合基因到宿主细胞实现恒久稳固表达的特点。。。。近年来,,,,被普遍用于基因机制与疾病爆发的研究中。。。。下面就一起来相识怎样在体外使用慢病毒玩转基因在疾病中的研究。。。。
案例1——慢病毒&细胞系
Identification and Validation of ATF3 Serving as a Potential Biomarker and Correlating With Pharmacotherapy Response and Immune Infiltration Characteristics in Rheumatoid Arthritis
虽然抗风湿药物(DMARDs)显著改善了类风湿枢纽炎(RA)患者的预后,,,,但约40%的RA患者治疗效果有限。。。。因此,,,,探索新的生物标记物以提高RA的治疗效果至关主要。。。。本研究开发一种新的生物标记物,,,,通过体外研究判断并验证了ATF3可以增进RA-FLS和MH7A的增殖、侵袭和迁徙,,,,可以在RA治疗中作为一种新的生物标记物,,,,并且与药物治疗反应和免疫细胞浸润相关。。。。
★细胞系:RA-FLS(RA成纤维样滑膜细胞) 、MH7A(人滑膜成纤维细胞系)
★基因调控手段:基因过表达(LV- ATF3 -OE)、基因滋扰(LV- ShATF3)
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案例2——慢病毒&原代细胞
Wnt4 is crucial for cardiac repair by regulating mesenchymal-endothelial transition via the phospho-JNK/JNK
Wnt4在发育历程中起着要害作用,,,,并在纤维化损伤历程中再次激活。。。。然而,,,,Wnt4在心脏修复中的作用尚不清晰。。。。本研究探索Wnt4在急性心肌缺血再灌注损伤中的病理心理作用及机制。。。。通过急性心脏缺血再灌注损伤后Wnt4的时空表达,,,,发明Wnt4作为一种早期损伤反应基因在靠近损伤界线区域的心脏成纤维细胞中上调,,,,并与间质-内皮转化(MEndoT)相关,,,,这是心脏修复中受损心肌血运重修的有益历程。。。。在心脏成纤维细胞中敲低Wnt4导致MEndoT降低和心功效恶化。。。。研究展现了Wnt4在心脏修复中起着要害的作用,,,,加入了磷酸化JNK介导的MEndoT,,,,并且是心脏成纤维细胞靶向治疗心脏疾病的要害基因。。。。
★心肌细胞:泉源于成年小鼠心脏
★基因调控手段:基因滋扰(LV-shWnt4/JNK1/JNK2)
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案例3——慢病毒&间充质干细胞
ac4C acetylation of RUNX2 catalyzed by NAT10 spurs osteogenesis of BMSCs and prevents ovariectomy-induced bone loss
N-乙酰;;;泼10 (NAT10)是mRNA n4 -乙酰胞苷(ac4C)修饰的要害酶,,,,加入多种细胞历程,,,,与多种疾病相关。。。。本研究探索了成骨细胞分解与NAT10和ac4C之间的关系,,,,我们发明NAT0表达和ac4C的总RNA水平在双侧卵巢切除(OVX)小鼠和骨质松散患者骨组织中降低。。。。过表达NAT10可逆转骨量丧失,,,,而NAT10抑制剂Remodelin可增进OVX小鼠的骨量丧失。。。。别的,,,,具有低水平ac4C修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在NAT10默然的情形下在体形状成较少的钙结节,,,,而具有高水平ac4C修饰的BMSCs在NAT10过表达的情形下形成更多的钙结节。。。。NAT10水平异??????赡苁堑贾鹿侵仕缮⒌幕浦,,,,NAT10有望成为该疾病潜在的治疗靶点。。。。
★BMSCs:骨髓间充质干细胞,,,,通过密度梯度离心法从康健供者骨髓中疏散获得
★基因调控手段:基因过表达(LV-NAT10-OE)、基因滋扰(siNAT10)
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案例4——慢病毒&类器官
Targeting the splicing factor NONO inhibits GBM progression through GPX1 intron retention
肿瘤已是威胁人类康健的主要因素。。。。治疗肿瘤药物的筛选与肿瘤免疫疗法的开发如日中天,,,,为肿瘤治疗带来全新的希望。。。。但受到患者作为研究工具的不可操控性,,,,且实验动物与人差别较大,,,,导致从基础研究光临床应用的转化效率极低,,,,肿瘤类器官的兴起为转化医学提供了全新的手艺平台。。。。肿瘤类器官研究已经成为肿瘤基础和临床研究中的主要工具,,,,尤其连系了基因修饰手艺,,,,对展现肿瘤爆发生长的机制、快速评估肿瘤药物与免疫细胞的治疗效果意义重大。。。。
本文在研究中便使用到类器官模子来探讨剪接因子在多形性胶质母细胞瘤(GBM)希望中的作用,,,,以及靶向它们来治疗GBM的可能性。。。。我们证实晰内含子保存是爆发在GBM希望中的一个要害的选择性RNA剪接事务,,,,并且NONO是GBM中mRNA剪接的要害调理因子。。。。过表达NONO可以增进GBM的成瘤,,,,敲低NONO导致GPX1的异常剪接,,,,抑制肿瘤生长、侵袭等。。。。因此,,,,靶向NONO为GBM的治疗提供了一种新的、潜在的治疗战略。。。。
★细胞:U251(GBM细胞系)、P3(GBM患者泉源的原代细胞)
★基因调控手段:基因过表达(LV-NONO-OE)、基因滋扰(siNONO和sh-NONO)
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案例5——慢病毒&破碎筛选标记
Split selectable markers
筛选标记普遍应用于转基因和基因组编辑中,,,,以选择具有理想基因型的工程细胞。。。。本研究提出了可拆分的筛选标记,,,,每一种标记都可以在慢病毒的介导下实现多个基因稳固共表达。。。。使用慢病毒系统,,,,建设并验证了Hygromycin,,,,Purromycin,,,,Neomycin和Blasticidin resistance抗性基因以及mScarlet荧光卵白的破碎筛选标记系统。。。。破碎筛选标记的要领在未来可实现在靶细胞中更大都目的基因修饰。。。。
★细胞:HEK293T(人胚肾细胞)、U2OS(人骨血瘤细胞)、HeLa(宫颈癌细胞)
UG环球生物一直致力于病毒载体的研制效劳,,,,拥有10万+的病毒包装履历/4.6万+病毒载体库,,,,包装GMP级别的病毒质粒。。。。UG环球生物拥有多种慢病毒包装系统:三质粒/四质粒包装系统。。。。
UG环球生物可提供过表达/滋扰、CRISPR/Cas9、Cumate诱导表达系统、Tet-on/off系统、Cre-loxp系统等专属您的定制慢病毒,,,,同时也涵盖CRISPR/Cas9敲除或激活文库、自噬单标或双标、萤光素酶现货慢病毒产品。。。。
连系UG环球生物自主研发获批专利的Vpack慢病毒包装系统,,,,能够周全知足在科学研究中对基因调控的需求。。。。值得一提的是,,,,Vpack系统攻克了病毒不出毒和滴度低的问题,,,,能包管lncRNA表达更准确,,,,载体荧光表达更亮,,,,病毒出毒更稳固。。。。让您在对细胞(细胞系、原代细胞、干细胞等)举行基因调控(过表达、敲低、滋扰等)的蹊径上无后顾之忧。。。。
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