UG环球双十一?科研不缺席 | 病毒载体的选择及应用
01
腺相关病毒
◆腺相关病毒（AAV）是细小病毒科家族的成员之一，，，，，是一类无法自主复制、无被膜的二十面体细小病毒，，，，，其直径约20-26nm，，，，，含有4.7kb左右的线状单链DNA作为基因组。。。。。由于其血清型多样、免疫原性极低、清静性高、宿主细胞规模广（对破碎细胞和非破碎细胞均具有熏染能力）、扩散能力强、体内表达基因时间长等特点，，，，，AAV被视为最有前途的基因研究和基因治疗载体之一。。。。。
◆纯化后的AAV病毒载体可以用于侵染细胞，，，，，侵染细胞时，，，，，AAV与细胞外貌特异性受体连系，，，，，激活胞内信号通路，，，，，进而触发AAV通过受体介导的内吞作用进入细胞，，，，，在核内体、高尔基体等细胞器的协助下进入细胞核，，，，，随后病毒裂解，，，，，其单链DNA复制成为双链DNA后表达目的基因。。。。。
◆AAV是表达小基因序列的理想载体，，，，，普遍应用于体内研究中。。。。。它们通常被用于向哺乳动物的大脑及各组织脏器递送外源基因、荧光标记、钙指示剂和心理操控工具等。。。。。
◆在借助AAV载体举行体内基因转达时，，，，，病毒的注射方法、注射体积及血清型的选择都是尤为主要。。。。。借助定点注射和系统注射，，，，，AAV载体能够在大宗细胞中普遍表达，，，，，AAV差别的血清型关于差别细胞亦有一定的亲嗜性，，，，，在详细研究时需注重差别血清型的选择（UG环球生物拥有多年AAV应用履历，，，，，接待咨询）。。。。。
◆在体外实验中，，，，，古板看法以为AAV的效率有限，，，，，且熏染细胞所需的MOI高。。。。。但近年来开发出的多种新型AAV载体为我们提供了一些新的思绪，，，，，如AAV-DJ血清型的AAV关于体外作育细胞系的熏染效率亦非？？晒，，，，，这为宽大研究者提供了新的思绪。。。。。
02
慢病毒
◆慢病毒载体（Lentivirus）是一类刷新自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，，，，，是逆转录病毒的一种，，，，，基因组是RNA，，，，，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，，，，，属于假型病毒。。。。？？墒褂媚孀济附庠椿蛘系交蜃橹惺迪治裙瘫泶，，，，，具有熏染破碎期与非破碎期细胞的特征。。。。。
◆慢病毒基因组进入细胞后，，，，，在细胞浆中反转录为DNA，，，，，形成DNA整合前复合体，，，，，进入细胞核后，，，，，DNA整合到细胞基因组中。。。。。整合后的DNA转录成mRNA，，，，，回到细胞浆中，，，，，表达目的卵白；；；；；或爆发小RNA。。。。。慢病毒介导的基因表达或小RNA滋扰作用一连且稳固，，，，，并随细胞基因组的破碎而破碎。。。。。
◆慢病毒载体具有宿主规模广，，，，，基因容量大等特点。。。。。体外应用时，，，，，慢病毒载体能够有用地熏染作育的神经元、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型原代细胞和大部分细胞系。。。。。由于慢病毒的熏染具有整合特征，，，，，其能够将外源基因有用地整合到宿主染色体上，，，，，因而可以抵达长期性表达，，，，，从而构建稳转细胞株，，，，，用于基因的细胞功效研究。。。。。
◆体内应用时，，，，，慢病毒载体的应用不如rAAV载体应用普遍，，，，，由于其具有一定的免疫原性，，，，，且随机整合特征可能导致细胞功效基因的异常。。。。。相较量腺相关病毒，，，，，慢病毒的扩散规模较小，，，，，但其表达更快、基因容量更大（可容纳4kb），，，，，可作为大容量基因的载体。。。。。
03
腺病毒
◆腺病毒（ADV）是一种无包膜的线性双链DNA病毒，，，，，其空间结构为立体对称的20面体，，，，，衣壳由252个壳粒组成，，，，，直径在100nm左右。。。。。现已知有51种腺病毒，，，，，凭证组织嗜性差别被分成ABCDEF六个差别亚群，，，，，其中C亚群的第2和第5血清型为最常见的腺病毒载体。。。。。
◆ADV的包装历程依赖于HEK-293细胞系。。。。。ADV对宿主细胞的侵染历程则是通过受体介导的内吞作用进入细胞内，，，，，基因组并不整合到宿主细胞基因组中，，，，，而是以游离状态在细胞核内表达，，，，，因而基于腺病毒载体的基因递送具有瞬时表达的特点。。。。。
◆腺病毒具有普遍的细胞和组织熏染能力，，，，，且其携带基因片断的容量大（能抵达7kb左右的容量）。。。。。体外应用时，，，，，腺病毒载体转基因效率高（靠近100%的转导效率），，，，，且可转导差别类型的细胞，，，，，关于大宗难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。。。。。在体内应用时，，，，，腺病毒具有嗜肝的特点，，，，，可经尾静脉注射熏染肝脏，，，，，但由于腺病毒免疫原性强，，，，，熏染强烈，，，，，故；；；；；嵋鸲锞植孔橹字⒎从突迕庖叻从，，，，，对动物体征和实验效果的客观性造成影响，，，，，因此，，，，，在使用腺病毒举行体内研究时，，，，，要思量其使用剂量。。。。。
◆腺病毒可在短时间内快速表达，，，，，一样平常1-3天即可抵达岑岭（tips：关于快速表达，，，，，亦可以选择双链腺相关病毒—scAAV，，，，，具有高效、快速、低免疫原性的特点）。。。。。另外，，，，，由于其基因容量大，，，，，这使得腺病毒在大基因片断的表达中作用主要。。。。。
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