随着研究的一直深入,,,,,现代神经科学需要关注大宗差别种类的神经元或胶质细胞,,,,,举行细腻研究,,,,,除了特异性启动子的应用外,,,,,还可以借助多种Cre小鼠模子配合DIO病毒战略或flox小鼠战略以实现特异性操作神经元的目的。。。。。
泉源于噬菌体P1的Cre/loxP系统主要包括2个主要组成部分:一个是loxP位点,,,,,另一个就是可以对loxP位点举行识别的Cre酶,,,,,使两个loxP位点间爆发基因重组,,,,,实现对目的基因删除、翻转、易位和序列交流。。。。。在神经科学领域,,,,,此手艺可以用于对神经环路的特异性标记、特异细胞类型中内源基因的功效研究及构建小鼠模子等。。。。。(更多Cre系统相关内容,,,,,可参考【知识分享】一半海水、一半火焰,,,,,分子表达操控中高频泛起的Cre、Flp、Dre等重组酶系统怎样事情)
使用基因敲入手段,,,,,借助CRISPR/Cas9手艺,,,,,将Cre重组酶定点插入到小鼠基因组中,,,,,获得可特异性在某类神经元中表达Cre的工具鼠,,,,,从而可以配合AAV-DIO病毒载体,,,,,做到精准操控神经元的目的,,,,,亦可以和多种Flox鼠搭配使用,,,,,研究差别基因的功效。。。。。
Cre鼠配合重组AAV病毒可在特定脑区实现细胞特异性标记、光遗传学和化学遗传学使用、在体钙成像纪录,,,,,或者组织特异性的基因编辑。。。。。
相较于转基因小鼠,,,,,借助病毒载体介导的Cre系统实现特异性操作神经元或基因的目的,,,,,同时可以大大缩短实验的周期,,,,,另外,,,,,多种多样的病毒载体,,,,,可以最大限度的知足种种实验的需求。。。。。州病毒载体的特点如下:
借助Cre品系的小鼠和Cre依赖表达的病毒载体连系使用,,,,,可以抵达特异性对某些细胞的标记和操控目的。。。。。运用神经示踪手艺对大脑特定神经环路的结构和功效举行剖析时,,,,,亦可以借助Cre重组酶系统和AAV血清型(好比rAAV2/9、rAAV2/retro、rAAV2/1)连系适用,,,,,抵达特异性对神经环路标记和功效研究的目的。。。。。
在现实举行实验课题历程中,,,,,病毒载体辅助和Cre小鼠的配合使用即有互补性,,,,,又能相互验证,,,,,成为动物体内研究尤其是神经科学领域研究中不可或缺的助力。。。。。