配景
中药既是历史上主要的治疗药物，，，，，也是新药的主要泉源。 。常山酮（HF）是一种由热敷皂苷衍生而来的小分子生物碱，，，，，在差别的细胞系中具有显着差别的抗增殖作用。 。然而，，，，，HF在体外是能抑制MCF-7细胞的生长以及这一历程的潜在机制尚不清晰。 。
外泌体是一种由细胞自然渗透的纳米巨细的囊泡，，，，，巨细在30-150nm。 。它由种种脂质、卵白质和RNA组成，，，，，包括microRNAs（miRNAs），，，，，这些分子通过外泌体可以在细胞间转达，，，，，起到了直接或间接的通讯作用。 。
本文[1]作者发明HF不但能抑制MCF-7细胞外泌体的渗透，，，，，同时降低了外泌体中microRNA-31（miR-31）的含量。 。MiR-31通过靶向HDAC2，，，，，进一程序节细胞周期调理卵白的水平，，，，，有助于HF的抗癌功效。 。
Results
1.HF对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响
为了探讨HF是否对MCF-7细胞的生长爆发影响，，，，，作者设置差别的HF浓度（25、50、100、200和400nM）和差别的时间点（0、12、24和48hr），，，，，并通过MTT和克隆形成检测细胞的生长情形。 。实验数据批注，，，，，HF对体外作育的MCF-7细胞的生长具有浓度依赖性和时间依赖性的抑制作用（Figure.1）。 。
Figure 1 HF能抑制人类乳腺癌细胞MCF-7的增殖
2.HF处置惩罚可镌汰MCF-7细胞的外泌体渗透
为了验证中药是否抑制MCF-7细胞的外泌体渗透，，，，，作者用HF处置惩罚MCF-7细胞并检测了肿瘤细胞作育上清的外泌体量。 。作者随后划分检测了AChE酶活（一种与外泌体膜相关的特殊酶）、BCA浓度、透射电镜（TEM）及外泌体卵白（Tsg101、CD63、CD81和CD9），，，，，通过这些数据，，，，，作者发明HF可抑制MCF-7细胞外泌体的渗透（Figure.2）。 。
Figure 2 HF处置惩罚可镌汰MCF-7外泌体的渗透
3.HF通过抑制外泌体的渗透来抑制MCF-7细胞的增殖
作者先用DiD染料标记MCF-7细胞渗透的外泌体，，，，，再将别的泌体与MCF-7细胞共作育，，，，，共聚焦激光扫描显微镜视察到外泌体漫衍在MCF-7细胞质中。 。随后作者用差别剂量的外泌体来处置惩罚MCF-7细胞，，，，，并用MTT法检测MCF-7细胞的增殖情形。 。作者发明，，，，，随着剂量的增添，，，，，MCF-7细胞的增殖也随着提升。 。接着作者考察了HF和GW4869（一种中性神经鞘磷脂酶抑制剂）对外泌体渗透的影响。 。数据批注，，，，，经GW4869预处置惩罚后，，，，，HF对MCF-7细胞渗透外泌体的抑制作用将更显着。 。别的，，，，，用HF和non-HF外泌体处置惩罚MCF-7细胞，，，，，效果显示，，，，，HF对MCF-7细胞增殖的抑制作用削弱。 。总之，，，，，这些数据展现了HF抑制外泌体渗透可能是HF抑制MCF-7细胞生长的机制（Figure.3）。 。
Figure 3 MCF-7泉源的外泌体对细胞增殖的影响
?4.HF通过降低外泌体miR-31抑制MCF-7增殖
作者检测了外泌体中84个与乳腺癌相关的miRNAs，，，，，发明MCF-7细胞在有HF处置惩罚和没有HF处置惩罚下外泌体中的miRNAs有很大差别，，，，，其中miR-31在HF处置惩罚过的外泌体中比non-HF处置惩罚的外泌体中更少。 。随后作者敲低了外泌体中的miR-31，，，，，将别的泌体加入受体细胞作育基中，，，，，发明敲低miR-31后外泌体对细胞增殖的抑制作用增强。 。接着作者过表达了外泌体中的miR-31，，，，，发明外泌体增进细胞的增殖。 。因此，，，，，这些数据批注外泌体miR-31能够增进MCF-7细胞增殖（Figure.4）。 。
?Figure 4 外泌体miR-31能增进MCF-7细胞的增殖
5.miR-31通过靶向HDAC2调理MCF-7细胞的生长
作者划分用miR-31 inhibitor、mimics或HF刺激MCF-7细胞，，，，，来改变MCF-7细胞渗透的外泌体中miR-31的水平，，，，，再用shotgun LC-MS/MS卵白组学手艺检测受体细胞MCF-7中核卵白的差别表达情形。 。效果显示，，，，，表达了miR-31 pre-miRNA的外泌体可抑制HDAC2的表达。 。别的，，，，，miR-31敲低/过表达或HF处置惩罚过的外泌体可调理HDAC2的表达和H3、H4乙；；；；纳系骰蛳碌。 。抑制HDAC2的表达可显着抑制MCF-7细胞的增添速率。 。总之，，，，，这些效果批注miR-31通过靶向HDAC2调理MCF-7细胞的生长（Figure.5）。 。
?Figure 5 miR-31通过靶向HDAC2抑制MCF-7细胞的增殖
6.HDAC2通过靶向MCF-7细胞中的G1/S组分对细胞周期环路起调控作用
作者接着检测了HDAC2对细胞周期的调控作用。 。HDAC2敲低后会使G1期细胞增添，，，，，S期和G2/M期镌汰，，，，，这说明晰HDAC2加入了细胞周期时钟的调控。 。在MCF-7细胞G1/S过渡历程中，，，，，HDAC2敲低可以抑制细胞周期的组分水平，，，，，包括cyclin D1和CDK2，，，，，同时增添细胞周期负调控因子p21的水平。 。别的，，，，，HDAC2敲低通过CDK2和cyclin D1转录激活影响pRb（retinoblastoma protein）卵白磷酸化。 。
随后作者也检测了用HF或miR-31 pre-miRNA处置惩罚细胞后其渗透的外泌体对cyclin D1、CDK2和p21的影响。 。效果发明，，，，，与non-HF外泌体处置惩罚组相比，，，，，HF外泌体能抑制cyclin D1、CDK2水平，，，，，同时提高p21水平；；；；与比照组相比，，，，，来自miR-31 pre-miRNA处置惩罚MCF-7细胞爆发的外泌体降低p21水平、增添CDK2和cyclin D1水平（Figure.6）。 。
Figure 6 HDAC2通过靶向G1/S转化调理组分抑制乳腺癌细胞的生长
总之，，，，，这些效果展现了HF处置惩罚会镌汰MCF-7细胞外泌体的释放（包括miR-31），，，，，该外泌体可转移miR-31到相近细胞，，，，，有助于抑制HDAC2表达。 。同时HDAC2可通过调理G1/S组分，，，，，如p21、CDK2和cyclin D1来调理细胞周期，，，，，从而抑制MCF-7细胞增殖(Figure.7）。 。
Figure 7 微情形中HF抑制MCF-7细胞增殖的机制
文章总结
本文作者验证了HF通过镌汰肿瘤泉源外泌体的爆发，，，，，在体外抑制MCF-7细胞的增殖，，，，，同时也视察到MCF-7受体细胞可以有用地吸收MCF-7供体细胞渗透的含miR-31的外泌体。 。别的，，，，，作者发明，，，，，增添外泌体miR-31含量可下调HDAC2基因的表达，，，，，而HDAC2基因通过调控MCF-7受体细胞中的G1/S组分如p21、CDK2和cyclinD1来调理细胞周期环路，，，，，从而增进细胞增殖。 。
参考文献
[1] miR-31 shuttled by halofuginone-induced exosomes suppresses MFC-7 cell proliferation by modulating the HDAC2/cell cycle signaling axis. J Cell Physiol. 2019 Aug;234(10):18970-18984.doi: 10.1002/jcp.28537. Epub 2019 Mar 27.
