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行业快讯

外泌体靶向递送|胶质母细胞瘤的反义寡核苷酸治疗

时间：2020-10-29 热度：

胶质母细胞瘤是最致命的原发性脑癌，，， ，，，患者的平均寿命缺乏1年，，， ，，，只有5%的患者能活到5年以上。。。。。胶质母细胞瘤的标准治疗是手术切除后加以放疗和替莫唑胺（TMZ）化疗，，， ，，，可是经常手术治疗是有限的，，， ，，，且包括TMZ在内的大大都药物都有严重的毒性和副作用，，， ，，，故近些年基因治疗的研究被逐步关注。。。。。

MicroRNA-21（miR-21）是包括胶质母细胞瘤在内的实体肿瘤中上调最高的miRNAs之一，，， ，，，下调miR-21可作为一种干预肿瘤细胞增殖和增添凋亡的要领。。。。。细胞外囊泡（EVs）是一种膜源性囊泡，，， ，，，由差别种细胞渗透，，， ，，，加入细胞间的信号传导。。。。。本篇文章中作者通过天生靶向胶质母细胞瘤的外泌体（T7-exo），，， ，，，经系统注射将T7-exo与脑部的胶质母细胞瘤连系，，， ，，，提高miRNA-21反义寡核苷酸（AMO-21）的递送效率。。。。。因此，，， ，，，T7-exo被以为是AMO-21靶向胶质母细胞瘤的有用载体。。。。。

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Fig.1 外泌体作用示意图
 
Result
1.RVG-和 T7-exo修饰及装载AMO-21的外泌体特征

作者划分将含RVG-Lamp2b和T7-Lamp2b质粒转染入293T细胞，，， ，，，疏散外泌体后再通过WB验证获得的RVG-exo和T7-exo都带有靶向配体。。。。。随后通过电转将AMO-21包裹入RVG-exo和T7-exo中，，， ，，，实验发明，，， ，，，AMO-21包裹入外泌体后对其巨细没有显着影响。。。。。同时，，， ，，，用扫描电子显微镜（SEM）视察外泌体在配体修饰前后和AMO-21装载前后的形态没有显著差别（Fig.1-2）。。。。。

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Fig.2 RVG-和 T7-exo修饰外泌体及装载AMO-21的外泌体特征视察
2.T7-exo装载AMO-21的体外转达效率

用FAM标记AMO-21s，，， ，，，随后将标记的AMO-21s电转入外泌体中，，， ，，，外泌体自己用DiI举行染色。。。。。将此装载后的外泌体与C6细胞共作育24h，，， ，，，用共聚焦显微镜和流式细胞仪评估AMO-21转达效率。。。。。效果显示，，， ，，，T7-exo转达AMO-21s的效率高于Unmod-exo和RVG-exo，，， ，，，同时用RT-PCR检测C6细胞中的miRNA-21水平也验证了AMO-21s的转达效率（Fig.3）。。。。。

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Fig.3 体外剖析RVG和T7修饰外泌体装载AMO-21s后的转达效率

MTT检测效果说明经RVG和T7修饰后的外泌体对C6细胞的活力基本不影响，，， ，，，而加了PEI25K组的C6细胞只有原来活力的80%。。。。。用外泌体和PEI25K处置惩罚红细胞，，， ，，，也发明PEI25k组中红细胞有严重的群集和裂解征象，，， ，，，而其他组与比照组相似，，， ，，，没有显着的群集和溶血征象。。。。。

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Fig.4 外泌体的生物相容性视察

3.T7-exo靶向脑部的转达效率

将Dil标记的外泌体通过尾静脉注射入大鼠中，，， ，，，发明T7-exo在脑部比其他外泌体有更强的信号，，， ，，，这说明T7-exo可以有用地转达AMO-21到脑部。。。。。随后将Cy5标记的AMO-21s装入Unmod-exo、RVG-exo和T7-exo中，，， ，，，再将这些外泌体划分IV注射入SD大鼠中。。。。。脑部信号效果显示，，， ，，，大脑中T7-exo递送AMO-21s的效率比Unmod-exo、RVG-exo高；；；；；；别的，，， ，，，肝脏和肾脏也具有较高的AMO-21信号。。。。。

WB效果显示，，， ，，，外泌体上T7配体的量少于RVG配体的量，，， ，，，可是T7-exo的转达效率高于RVG-exo，，， ，，，这也批注晰T7是比RVG更有用的靶向脑部的配体。。。。。

 
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Fig.5 RVG-exo和T7-exo在体内转达到大脑的效率
 
4.装载AMO-21s的外泌体在脑瘤动物模子中的治疗效果

将装载了AMO-21s的外泌体注射入脑瘤动物模子中，，， ，，，检测到RVG-exo和T7-exo介导的AMO-21s能有用降低脑部的miR-21水平，，， ，，，这批注晰RVG和T7配体可能提高了外泌体向脑部的靶向运输。。。。。

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Fig.6 体内递送AMO-21s后对miR-21水平影响
 

外泌体递送AMO-21s的治疗效果也可通过PDCD4和PTEN水平来评估。。。。。由于PDCD4和PTEN卵白在胶质母细胞瘤中调理细胞周期和凋亡，，， ，，，因此PDCD4和PTEN的上调与AMO-21的治疗效果有关。。。。。效果批注，，， ，，，与其他载体和外泌体相比，，， ，，，T7-exo递送AMO-21s能更有用地提高PDCD4和PTEN的表达水平（Fig.7）。。。。。

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Fig.7 免疫染色效果
 

大鼠在接种肿瘤细胞13天后被正法，，， ，，，同时检测肿瘤的巨细和面积。。。。。效果批注，，， ，，，T7-exo/AMO-21s能有用地减小肿瘤，，， ，，，且注射了RVG-exo/AMO-21和T7-exo/AMO-21的两组肿瘤巨细还不到比照组肿瘤巨细的一半。。。。。随后将小剂量的T7-exo/AMO-21定位注射入胶质母细胞瘤大鼠模子中，，， ，，，效果显示，，， ，，，当使用T7-exo将约42 ng的AMO-21直接递送至肿瘤部位时，，， ，，，肿瘤的巨细减小了（Fig.8）。。。。。

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Fig.8 AMO-21的抗肿瘤效果

 
总结

在本研究中，，， ，，，T7肽被评价为一种新的靶向配体，，， ，，，用于外泌体介导的AMO-21向胶质母细胞瘤的转达。。。。。胶质母细胞瘤的体外研究和原位胶质母细胞瘤模子的体内研究批注，，， ，，，T7-exo比RVG-exo、Unmod-exo和PEI25k对脑胶质母细胞瘤具有更高的AMO-21转达效率。。。。。

 
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