氧化应激被以为是内皮/血管功效障碍的主要因素，，，，这在许多心脑血管疾病中都有发明。 。。。。有文献报道，，，，经缺氧处置惩罚的内皮细胞（ECs）和缺氧缺葡萄糖处置惩罚的脑切片模子中活性氧（ROS）的爆发增添了。 。。。。别的，，，，氧化应激还与朽迈相关的血管功效障碍有关。 。。。。因此，，，，减轻氧化应激是改善血管功效进而治疗血管疾病的主要战略，，，，尤其是晚年人。 。。。。
血管主要素转换酶2 (ACE2)是肾素-血管主要素系统的负调理因子，，，，通过将血管主要素II (Ang II)转化为血管主要素，，，，加入血管功效的调理。 。。。。ACE2/血管主要素信号传导可以预防血管功效障碍和氧化应激。 。。。。文献中提出，，，，ACE2过表达可镌汰小鼠的缺血性脑损伤，，，，而ACE2缺乏会增添成年小鼠大脑动脉的氧化应激和内皮功效障碍。 。。。。别的，，，，文献还发明ACE2对内皮祖细胞（EPCs）具有 ；；；ぷ饔。 。。。。在EPCs中过表达ACE2（ACE2-EPCs）可镌汰细胞凋亡、减轻氧化应激和改善EPC功效。 。。。。EPCs是骨髓泉源的祖细胞，，，，具有向ECs分解的能力，，，，在维持内皮功效和止血方面施展主要作用。 。。。。
外泌体是一种胞外囊泡，，，，它们可通过递送卵白质和microRNAs介导细胞间通讯。 。。。。近期文献发明，，，，干细胞泉源的胞外囊泡能转达其母细胞的特征，，，，如来自康健比照组的EPCs泉源的囊泡通过其携带的miR-126对糖尿病患者的EPCs功效具有 ；；；ぷ饔。 。。。。可是，，，，ACE2-EPC-EXs在朽迈历程中对氧化应激的调理作用仍然未知。 。。。。
在本篇研究中，，，，作者想视察出相近年轻的ECs，，，，ACE2-EPC-EXs是否通过miR-18a/Nox2/ROS途径能更好地 ；；；ば嗦鮁Cs对抗缺氧/复氧（H/R）诱导的氧化应激。 。。。。
UG环球生物可提供从实验设计、外泌体疏散、外泌体判断、外泌体高通量检测、外泌体示踪到体内外功效验证的整体效劳。 。。。。
实验效果
1.朽迈ECs的特征
为了估算朽迈的最先时间，，，，作者用细胞朽迈的标记物SA-β-gal举行染色视察。 。。。。效果显示，，，，与比照组ECs相比，，，，用Ang II刺激的细胞其SA-β-gal染色显着增添（Fig. 1A），，，，批注晰EC朽迈模子的建设是乐成的。 。。。。同时作者也发明在朽迈ECs中p16水平显著增添（Fig. 1B）。 。。。。值得注重的是，，，，在朽迈的ECs中，，，，ACE2和miR-18a的水平都下降了（Fig. 1D）。 。。。。Ang II诱导EC朽迈，，，，引起ROS过量爆发（Fig. 1C）和ECs的成管能力受损（Fig. 1E）。 。。。。
Fig. 1 Ang II诱导的EC朽迈模子特征
2.EPCs转染ACE2后，，，，使得ACE2-EPCs及其释放的外泌体中ACE2和miR-18a水平升高
如Fig. 2A和B所示，，，，与EPCs和EPC-EXs相比，，，，ACE2-EPCs和它们释放的外泌体中ACE2的的mRNA水平显示是上调的，，，，这批注ACE2-EPC-EXs乐成爆发了。 。。。。同时，，，，miR-18a水平在ACE2-EPCs和ACE2-EPC-EXs中也是增添的，，，，这说明晰miR-18a在ACE2-EPC-EXs中的潜在作用。 。。。。在ACE2-EPCs中使用miR-18a抑制剂来敲低miR-18a水平并不会改变ACE2的表达，，，，但会下调ACE2-EPCs和ACE2-EPC-EXs中miR-18a的水平。 。。。。ACE2抑制剂DX600可抑制ACE2-EPCs和ACE2-EPC-EXs中ACE2诱导的miR-18a升高。 。。。。
凭证NTA效果（Fig. 2C），，，，四种类型的EXs在巨细和浓度上没有显著差别，，，，说明转染miR-18a抑制剂并没有改变ACE2-EPCs释放的外泌体。 。。。。
Fig. 2 剖析ACE2-EPCs及其释放的EXs中ACE2和miR-18a的水平，，，，并评估EX的巨细和浓度
3.ACE2-EPC-EX与ECs共作育会使ECs中ACE2和miR-18a水平增添
如Fig. 3A所示，，，，用PKH26标记的EXs在年轻和朽迈的ECs细胞质中被发明，，，，批注年轻和朽迈的ECs都可以吸收EXs。 。。。。为了剖析ACE2-EPC-EXs是否能将其携带的ACE2和miR-18a转达给ECs，，，，作者用qRT-PCR检测与三种差别类型的EPC-EXs共作育后的年轻和朽迈ECs中ACE2和miR-18a水平。 。。。。作者数据（Fig. 3B）显示，，，，与空载的vehicle和EPC-EXs共作育后的ECs中ACE2的mRNA水平没有差别。 。。。。然而，，，，与ACE2-EPC-EXs共作育后能显著提高ACE2水平，，，，且在朽迈的ECs中水平更高。 。。。。在ECs中，，，，ACE2-EPC-EXs共作育比EPC-EXs更有用地提高了miR-18a水平，，，，而在朽迈的ECs中则更高。 。。。。别的，，，，ECs与ACE2-EPC-EXs+DX600或ACE2-EPC-EXsanti-miR-18a共作育后，，，，其miR-18a水平下调，，，，可是ACE2表达则没有转变（Fig. 3C）。 。。。。
Fig. 3 ACE2-EPC-EXs与H/R损伤的ECs连系，，，，改变了ECs中的ACE2和miR-18a水平
4.ACE2-EPC-Exs在镌汰ECs中H/R诱导的细胞凋亡和功效障碍方面比EPC-EXs更有用，，，，对朽迈的ECs效果更好
为了确定ACE2-EPC-EXs是否能 ；；；Cs免受H/R损伤，，，，作者将差别类型的EPC-EXs划分与年轻的和朽迈的ECs共作育来评估其凋亡率。 。。。。如Fig. 4A所示，，，，H/R诱导的朽迈ECs的凋亡率高于年轻ECs。 。。。。与未载EX的vehicle（H/R条件下作育）相比，，，，EPC-EXs共作育显著降低了年轻和朽迈ECs的凋亡。 。。。。ACE2-EPC-EXs在降低H/R诱导的EC凋亡方面比EPC-EXs更有用。 。。。。更主要的是，，，，ACE2-EPC-EXs共作育会使年轻ECs的H/R诱导的凋亡率从30%降低到9%左右，，，，使朽迈ECs的H/R诱导的凋亡率从68%降低到17%左右，，，，这个数听说明ACE2-EPC-EXs对朽迈ECs的抗凋亡作用近年轻ECs效果更好。 。。。。同时，，，，作者也发明敲低miR-18a能部分抑制ACE2-EPC-EXs的抗凋亡作用。 。。。。与ACE2-EPC-EXs+DX600共作育的ECs也有类似的作用。 。。。。
如Fig. 4B所示，，，，血管天生实验效果显示，，，，H/R可降低年轻和朽迈ECs的成管能力，，，，而EPC-EXs可改善这一情形。 。。。。ACE2-EPC-EXs比EPC-EXs更能有用地改善H/R诱导的EC成管能力损伤。 。。。。别的，，，，ACE2-EPC-EXs显著提高了ECs的成管能力，，，，年轻的ECs约140%，，，，朽迈的ECs约150%。 。。。。ACE2-EPC-EXs+DX600和ACE2-EPC-EXs anti-miR-18a?会部分降低了ACE2-EPC-EXs的促血管天生作用，，，，这说明晰miR-18a加入了ACE2-EPC-EXs的促血管天生作用。 。。。。
Fig. 4 ACE2-EPC-EXs在H/R损伤的年轻和朽迈的ECs中能更好的镌汰细胞凋亡和改善ECs功效的作用，，，，尤其在朽迈的ECs中具有更显着的效果
5.ACE2-EPC-EXs在降低ECs中H/R诱扶引起的ROS过量爆发和Nox2表达方面比EPC-EXs更有用，，，，对朽迈的ECs有更好的作用
为了确定ACE2-EPC-EXs是否可以通过削弱氧化应激来 ；；；Cs免受H/R损伤，，，，作者剖析了与差别类型的EPC-EXs共作育后年轻的和朽迈的ECs的ROS爆发情形。 。。。。如Fig. 5A所示，，，，H/R诱导的ROS水平在朽迈的ECs中比在年轻的ECs中要高。 。。。。EPC-EXs共作育能降低年轻的和朽迈ECs中ROS的过量爆发。 。。。。ACE2-EPC-EXs比EPC-EXs更有用地镌汰H/R诱导的ROS过量爆发。 。。。。更主要的是，，，，ACE2-EPC-EXs共作育可镌汰H/R诱导的ROS过量爆发，，，，其中在年轻的ECs中镌汰约38%，，，，在朽迈的ECs找谁人镌汰约55%，，，，这批注晰相近年轻的ECs，，，，ACE2-EPC-EXs对朽迈的ECs有更好的抗氧化作用。 。。。。敲低miR-18a能部分阻断两种ECs中ACE2-EPC-EXs的抗氧化作用，，，，对朽迈ECs的抑制作用更强，，，，这提醒了miR-18a可能在ACE2-EPC-EXs的抗氧化作用中施展要害作用。 。。。。
Fig. 5 ACE2-EPC-EXs在降低年轻和朽迈的ECs中由H/R诱导的ROS过量爆发和增添NO下调方面具有更好的作用，，，，尤其在朽迈的ECs中效果更好
6.ACE2-EPC-EXs比EPC-EXs在提高H/R诱导的ECs中NO天生和eNOS表达下降方面更有用，，，，对朽迈的ECs有更好的作用
作者也剖析了与差别类型EPC-EXs共作育后年轻和朽迈的ECs中CO爆发和eNOS水平的情形。 。。。。如Fig. 5B所示，，，，与年轻的ECs相比，，，，H/R降低了朽迈ECs的CO水平。 。。。。EPC-EXs共作育增添了年轻和朽迈ECs中NO的爆发。 。。。。ACE2-EPC-EXs比EPC-EXs能更有用地增添NO的爆发。 。。。。别的，，，，ACE2-EPC-EXs共作育可提高年轻ECs中NO的爆发约81%，，，，而朽迈ECs中提高约91%，，，，这也说明晰与年轻ECs相比，，，，ACE2-EPC-EXs对朽迈ECs显示出更好的作用。 。。。。敲低miR-18a在两种类型ECs中都部分阻断了ACE2-EPC-EXs的这种作用，，，，对朽迈ECs有更强的抑制作用。 。。。。
如Fig.6B所示，，，，与年轻的ECs相比，，，，H/R降低了朽迈ECs中的eNOS水平。 。。。。EPC-EXs共作育能显著增添年轻和朽迈ECs中的eNOS水平。 。。。。ACE2-EPC-EXs共作育可使年轻ECs的eNOS水平提高约143%，，，，使朽迈ECs的eNOS水平提高约166%，，，，这批注与年轻ECs增添的eNOS水平相比，，，，ACE2-EPC-EXs对朽迈ECs中eNOS水平提高具有更好的作用。 。。。。类似地，，，，敲低miR-18a能部分阻断这种效应。 。。。。总之，，，，ACE2-EPC-EXs可以通过miR-18a/eNOS/NO通路改善H/R诱导的EC功效。 。。。。
Fig. 6 在H/R条件下，，，，ACE2-EPC-EXs能较好地降低年轻和朽迈ECs的Nox2水平和增添eNOS水平，，，，对朽迈ECs有较好的疗效
文章结论：
在受到H/R损伤条件下，，，，ACE2-EPC-EXs体现出对朽迈的ECs近年轻的ECs有更强的抗氧化和抗凋亡作用，，，，主要是通过其携带的miR-18a并随后下调Nox2/ROS途径实现的。 。。。。进一步的实验还可以用于检测ACE2-EPC-EXs在体内的 ；；；ぷ饔，，，，并确定miR-18a的靶标。 。。。。这些要领可能极大地提高我们对ACE2介导的缺血性脑卒中 ；；；さ姆肿踊〉氖煜，，，，并可能为开发新的治疗要领提供参考依据。 。。。。
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